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成功的IHC/ICC实验操作指南(一)

细胞实验、动物实验是科学研究的基础,那么IHC/ICC实验就不可避免。如何设计一个成功的IHC/ICC实验呢?从这篇推文中你将找到答案。

设计一个成功的IHC/ICC实验

免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学(ICC)是用来定位检测抗原表达的技术,其主要原理是利用抗原表位和抗体间的相互作用。IHC使用组织切片,而ICC使用培养的细胞或细胞悬浮液。最后,IHC/ICC均需使用分子标记物(荧光或染料)来得到阳性染色结果。简而言之,先固定样本以保持细胞完整性,再使用封闭试剂孵育该样本,以覆盖抗体可能结合的非特异性位点,最后使用一抗、二抗孵育该样本,并在显微镜下观测信号结果。

从技术上讲,IHC/ICC是相对简单和直接的实验方法。然而每个IHC/ICC实验都有多个需要优化的变量。最主要的挑战是针对不同抗原,如何优化实验条件,以产生特异性高且信号强的实验结果。例如,在培养的细胞上检测一种高丰度的蛋白,固定时间和封闭时间可能就要缩短,并适合使用荧光偶联的一抗检测。相反,如果在一个冰冻组织切片中检测磷酸化表位,可能需要进行抗原的修复,染色信号也需要放大。

下表列出了影响IHC/ICC的变量和因素,旨在有助于IHC/ICC实验的设计、优化及疑难的解答。

  • 影响实验设计和优化的变量

*这些变量还需要对额外因素进行优化包括浓度、pH、温度、孵育时间和稀释度。

该表格并不包含所有细节,但是涵盖了R&D Systems所使用的最常用的IHC/ICC方法。

以上文字和图片来源于Bio-techne。

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